高脂血癥是血脂代謝異常所致。隨著人們生活水平的提高，高脂血癥成為人類健康“隱形的殺手”，因血脂過(guò)高誘發(fā)的動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病、心肌梗死等心腦血管疾病已成為全球人類健康“第一殺手”。
近年來(lái)，降血脂藥物的研究備受學(xué)術(shù)界關(guān)注，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)降血脂藥物的作用途徑、作用機(jī)理及篩選方法進(jìn)行了廣泛探討。本文簡(jiǎn)要概述近年來(lái)降血脂的實(shí)驗(yàn)方法研究進(jìn)展。
1 體外實(shí)驗(yàn)方法
1.1 分子水平 膽固醇是動(dòng)物機(jī)體不可或缺的重要類脂分子，但過(guò)多的膽固醇會(huì)引起動(dòng)脈硬化，已成為導(dǎo)致人類心血管疾病的重要因子之一。膽固醇的生物合成可分為3個(gè)階段：甲羥戊酸的合成;鯊烯的合成;27C膽固醇的合成。其中參與第一階段合成的HMG-CoA還原酶是膽固醇生物合成的限速酶。通過(guò)抑制HMG-CoA還原酶的活性，可以減少內(nèi)源性膽固醇的生成，從而起到降血脂作用。
分光光度法：李鵬等研究了血脂康與洛伐他汀、辛伐他汀對(duì)HMG-CoA還原酶抑制作用的比較，從豬肝中提取HMG-CoA還原酶，以NADPH、Cysteamine為底物，HMG- CoA還原酶為催化劑，通過(guò)監(jiān)測(cè)由于NADPH的氧化而使340nm吸收的下降率來(lái)測(cè)定可溶性酶的活性，測(cè)活體系(1 ml)：70 mM磷酸緩沖液，pH 6.5，2 mM EDTA，2 mM Cysteamine，0.06%BSA，0.25 mM NADPH，抑制劑濃度0~200 μg/ml，酶制品50 μL。這種分析方法快速，不必分離底物與產(chǎn)物，以Cysteamine代替昂貴的HMG-CoA可以極大地節(jié)約成本。但由于背景反應(yīng)明顯,且有光散射性，故只適用于測(cè)定可溶性還原酶活性,而不適用于微粒體。作者認(rèn)為采用高效液相色譜法在340 nm對(duì)NADPH進(jìn)行分離測(cè)定，結(jié)果應(yīng)該更加準(zhǔn)確可靠，且成本低，可以大規(guī)模篩選，但目前尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。
薄層層析法：胡海峰等建立了體外酶反應(yīng)系統(tǒng)，以HMG-CoA還原酶抑制劑美伐他汀為陽(yáng)性對(duì)照，使用TLC分析膽固醇合成量的多少，篩選從土壤中分離的真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物。薄層層析法可有效地將底物與產(chǎn)物分離，是一種常用方法。其它分離方法，如紙層析法和柱層析法，也可達(dá)到同樣的目的。
同位素?fù)饺敕ǎ河檬蟾挝⒘ｓw或胞漿酶作為粗酶制劑，在反應(yīng)體系中加入同位素標(biāo)記的合成前體如<��14�C>-乙酸，或D，L- <��14�C>HMG-CoA，或D，L<�14�C>-甲羥戊酸作為底物，反應(yīng)后測(cè)定形成的固醇中同位素的摻入率，樣品抑制固醇脂質(zhì)合成能力可以通過(guò)與對(duì)照組數(shù)據(jù)對(duì)比求得。該方法簡(jiǎn)便，可以省略分離步驟，且靈敏度高，定位定量準(zhǔn)確，但對(duì)實(shí)驗(yàn)人員要求較高。
最近，我國(guó)學(xué)者發(fā)現(xiàn)調(diào)控膽固醇代謝新機(jī)制：加速膽固醇合成代謝關(guān)鍵酶-羥甲基戊二酰輔酶A還原酶的降解，可以增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)低密度脂蛋白的吸收，降低血液膽固醇水平。這一重要發(fā)現(xiàn)為尋找有效的新型降膽固醇藥物提供了靶點(diǎn)和理論基礎(chǔ)。
1.2 細(xì)胞水平 細(xì)胞內(nèi)膽固醇的流出對(duì)維持細(xì)胞膽固醇平衡、促進(jìn)膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)及抗動(dòng)脈粥樣硬化都起著非常重要的作用。
張露等研究了銀杏葉提取物GBE50對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)膽固醇代謝的影響，采用膽固醇氧化酶終點(diǎn)法檢測(cè)GBE50對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞HepG2、HUVEC、SH-SY5Y總膽固醇含量的影響。結(jié)果表明，GBE50可有效降低部分培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)總膽固醇的含量。
于碧蓮等研究了煙酸對(duì)分化成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞膽固醇流出的影響，3T3-L1細(xì)胞促分化成熟后，給予不同濃度的煙酸干預(yù)24 h后，收集細(xì)胞，采用液體閃爍計(jì)數(shù)器檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出。結(jié)果表明，煙酸可加速細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出，降低細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量。
匡雙玉等以血管平滑肌細(xì)胞源性荷脂細(xì)胞為模型，不同濃度姜黃素作用于細(xì)胞24 h及同一濃度姜黃素不同時(shí)間作用于細(xì)胞，高效液相色譜分析法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)總膽固醇。結(jié)果表明，姜黃素可降低血管平滑肌細(xì)胞源性荷脂細(xì)胞內(nèi)總膽固醇、游離膽固醇和膽固醇酯含量，且這種作用跟SREBP-Ⅰ蛋白的表達(dá)上調(diào)有一定關(guān)系。
2 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)方法
2.1 高脂乳劑及飼料模型 萬(wàn)麗等研究了脂肪乳劑的最佳配制(配方：20 g 豬油，10 g 膽固醇，1 g 丙硫氧嘧啶，吐溫-80 20 ml，丙二醇 20 ml，10%去氧膽酸鈉水溶液 20 ml，加蒸餾水至100 ml)，建立小鼠高脂血癥模型，用酶比色法測(cè)定模型組與正常組血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)。結(jié)果，模型組與正常組TC、TG差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明，該方法切實(shí)可行。
劉全亮等飼喂小鼠高脂飼料(配方：77.5%基礎(chǔ)飼料，2%膽固醇，10%豬油，10%蛋黃粉，0.5%去氧膽酸鈉)，建立小鼠高脂血癥模型，分別給予含等量總黃酮的不同純度的山楂葉總黃酮樣品，測(cè)定小鼠血清TC、TG值。結(jié)果表明，不同純度的山楂葉總黃酮樣品均有明顯降低高脂血癥小鼠TC和TG的作用。
高脂乳劑及飼料模型中報(bào)道的造模時(shí)間相差較大，可能原因是兩者的配方差異較大及灌胃方式不同所致。根據(jù)作者的研究情況，小鼠造模時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，不易成功;而兔造模時(shí)間相對(duì)較短，易成功?？赡茉蚴切∈蟮淖晕艺{(diào)節(jié)能力相對(duì)較強(qiáng)，被吸收的膽固醇在體內(nèi)可以較快的進(jìn)行代謝、轉(zhuǎn)運(yùn)。
2.2 蛋黃乳液模型 劉凱等進(jìn)行了大鼠高膽固醇血癥快速造型法初篩降脂中草藥的研究，大鼠腹腔注射75%蛋黃乳液(新鮮雞蛋，取蛋黃用消毒生理鹽水配成75%乳液)，24 h血清TC達(dá)到峰值，即復(fù)制出高膽固血癥模型。大槐合劑組各鼠TC值，與造模組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與傳統(tǒng)造型方法所得到的結(jié)果相同。
李亞紅等研究了丹皮酚、山楂黃酮不同劑量配伍對(duì)高脂血癥小鼠血清TC的影響，采用小鼠腹腔注射75%蛋黃乳液造模，用終點(diǎn)法試劑盒測(cè)定血清TC含量。結(jié)果表明，丹皮酚與山楂黃酮以2:1的比例配伍具有明顯的降低血清TC作用。
楊曉泉等采用75%蛋黃乳誘導(dǎo)小鼠高膽固醇血癥，研究柚皮中黃酮化合物對(duì)小鼠血脂的影響。結(jié)果，柚皮黃酮化合物能顯著降低小鼠血清的TC、TG和LDL-C的濃度，并提高HDL-C濃度。
蛋黃乳液模型具有操作簡(jiǎn)便、快速，且造模周期短、易成功的特點(diǎn)。腹腔中的腹膜表面積大，密布血管和淋巴管，吸收能力特強(qiáng)，血清膽固醇的升高可能是由于外源性膽固醇的迅速吸收所致。
2.3 其它模型 其它常用的降血脂動(dòng)物模型還有Triton WR-1339(表面活性劑)尾靜脈注射法。從尾靜脈注射Triton WR-1339鹽水溶液給大鼠，注射后立即停止喂食，并持續(xù)饑餓，被檢測(cè)的大鼠在注射Triton后分幾次給藥，在注射Triton 24 h后取肝和血漿測(cè)總膽固酵和三酰甘油，用于對(duì)評(píng)價(jià)樣品降血脂的效果。
影像學(xué)研究也可揭示藥物在延緩和逆轉(zhuǎn)頸動(dòng)脈粥樣硬化病變進(jìn)展方面的療效。主要是通過(guò)超聲檢測(cè)頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度(inteima-media thickness，IMT)來(lái)判斷藥物療效，該方法越來(lái)越受到人們的重視。
3 結(jié)語(yǔ)
高脂血癥引發(fā)的心腦血管類疾病是危害人類健康的三大疾病之一，尋找有效、安全的降脂藥物成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)，降血脂實(shí)驗(yàn)方法的發(fā)展為藥物的篩選提供了新的思路，拓展了研究領(lǐng)域。降血脂藥物的篩選具有重大的現(xiàn)實(shí)意義與廣泛的應(yīng)用前景，本文簡(jiǎn)要介紹的國(guó)內(nèi)外資料具有一定的參考價(jià)值。
